熟制动物性水产制品检测

本方案适用草鱼、海虾、海螃蟹可食部分己二烯雌酚、己烯雌酚、己烷雌酚、雌酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇、17-α羟基孕酮、21-α羟基孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、左炔诺孕酮、甲羟孕酮、诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、勃地酮、孕酮、群勃龙、甲基睾酮、雄烯二酮、美雄酮、炔诺酮、康力龙、丙酸睾酮的检测。

(1)27种性激素混合标准储备液：迪马标准品部提供(Cat.#: 48337)；

(2)混合标准中间液Ⅰ：准确吸取0.1mL混合标准储备液，用甲醇定容至10mL，配制成己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、17-α羟基孕酮、21-α羟基孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羟孕酮、诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、勃地酮、孕酮、群勃龙、甲基睾酮、雄烯二酮、美雄酮、丙酸睾酮终浓度1μg/mL，己烷雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇、左炔诺孕酮、炔诺酮、康力龙终浓度2μg/mL，雌三醇、炔雌醇终浓度4μg/mL的混合标准溶液；

(3)混合标准中间液Ⅱ：准确吸取0.2mL混合标准储备液，用甲醇定容至1mL，配制成己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、17-α羟基孕酮、21-α羟基孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羟孕酮、诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、勃地酮、孕酮、群勃龙、甲基睾酮、雄烯二酮、美雄酮、丙酸睾酮终浓度0.2μg/mL，己烷雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇、左炔诺孕酮、炔诺酮、康力龙终浓度0.4μg/mL，雌三醇、炔雌醇终浓度0.8μg/mL的混合标准溶液；

(4)混合内标工作液：分別准确吸取内标储备液，用甲醇稀释至雌二醇-¹³C₂浓度2μg/mL，己烯雌酚-D₈、雌酮-D₂、甲基睾酮-D₃、孕酮-D₉、甲羥孕酮-D₃、左炔諾孕酮-D₆浓度1μg/mL。

称取试样5g，于50mL离心管中，准确加入30μL混合内标工作液和乙酸-乙酸钠缓冲液10mL，涡旋30s，加乙酸乙酯-甲基叔丁基醚溶液10mL，涡旋1min，超声10min，涡旋混合1min，于8000r/min离心8min，取上层有机相于100mL梨形瓶；残渣用乙酸乙酯10mL重复提取1次，有机相合并至梨形瓶中，于35℃水浴旋转蒸发至干，氮吹旋蒸瓶中剩余油脂，将乙酸乙酯吹除干净，加入正己烷7mL溶解残留物，待净化。

乙酸-乙酸钠缓冲溶液：取13.0g无水乙酸钠，冰乙酸2.6mL，用水定容到500mL。

乙酸乙酯-甲基叔丁基醚溶液：取乙酸乙酯和甲基叔丁基醚等体积混合。

(1)草鱼

(2)海虾

(3)海螃蟹

标准品己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、17-α羟基孕酮、21-α羟基孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羟孕酮、诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、勃地酮、孕酮、群勃龙、甲基睾酮、雄烯二酮、美雄酮、丙酸睾酮浓度5ng/mL，己烷雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇、左炔诺孕酮、炔诺酮、康力龙浓度10ng/mL，雌三醇、炔雌醇浓度20ng/mL，雌二醇-¹³C₂浓度60ng/mL，己烯雌酚-D₈、雌酮-D₂、甲基睾酮-D₃、孕酮-D₉、甲羟孕酮-D₃、左炔诺孕酮-D₆浓度30ng/mL检测的XIC图

标准品己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、17-α羟基孕酮、21-α羟基孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羟孕酮、诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、勃地酮、孕酮、群勃龙、甲基睾酮、雄烯二酮、美雄酮、丙酸睾酮浓25ng/mL，己烷雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇、左炔诺孕酮、炔诺酮、康力龙浓度50ng/mL，雌三醇、炔雌醇浓度100ng/mL，雌二醇-¹³C₂浓度60ng/mL，己烯雌酚-D₈、雌酮-D₂、甲基睾酮-D₃、孕酮-D₉、甲羟孕酮-D₃、左炔诺孕酮-D₆浓度30ng/mL检测的XIC图

标准品己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、17-α羟基孕酮、21-α羟基孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羟孕酮、诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、勃地酮、孕酮、群勃龙、甲基睾酮、雄烯二酮、美雄酮、丙酸睾酮浓度100ng/mL，己烷雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇、左炔诺孕酮、炔诺酮、康力龙浓度200ng/mL，雌三醇、炔雌醇浓度400ng/mL，雌二醇-¹³C₂浓度60ng/mL，己烯雌酚-D₈、雌酮-D₂、甲基睾酮-D₃、孕酮-D₉、甲羟孕酮-D₃、左炔诺孕酮-D₆浓度30ng/mL检测的XIC图

标准品己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、17-α羟基孕酮、21-α羟基孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羟孕酮、诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、勃地酮、孕酮、群勃龙、甲基睾酮、雄烯二酮、美雄酮、丙酸睾酮浓度5ng/mL，己烷雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇、左炔诺孕酮、炔诺酮、康力龙浓度10ng/mL，雌三醇、炔雌醇浓度20ng/mL，雌二醇-¹³C₂浓度60ng/mL，己烯雌酚-D₈、雌酮-D₂、甲基睾酮-D₃、孕酮-D₉、甲羟孕酮-D₃、左炔诺孕酮-D₆浓度30ng/mL的定量离子色谱图

更多谱图详见迪马科技。

(1)草鱼、海虾、海螃蟹样品，27种性激素添加回收率60%-120%，符合标准要求；

(2)苯甲酸雌二醇和孕酮不同于标准，选择了加NH₄峰，响应强度更高，便于定量；

(3)海虾和海螃蟹样品净化小柱多加一层Silica吸附填料，可以避免这类比较脏样品上样时过载导致的己二烯雌酚和己烷雌酚流失、回收率异常的现象，提高回收结果。